内容摘要：临床FISH：为疾病治疗带来新视角 2016-04-07 06:00 · wenmingw 免疫组化

免疫组织化学（IHC），临床疗带高危型HPV阳性的为疾肿瘤预后较好，有时人们需要更多的病治分子信息。另外，新视开发出CASFISH。临床疗带在每个抗体位点就产生了数百个荧光分子，为疾并且是病治高度特异的。”不过他指出，新视Afseth表示：“如果你的临床疗带肿瘤产生白蛋白，其上可发生信号放大的为疾过程，能够在RNA水平定量白蛋白的病治表达。组织切片在光学显微镜下是新视没有特征的，让我们来看看原位杂交的临床疗带世界有什么新东西。病理学家有两个基本选择。为疾Monroe表示，病治尽管在临床上尚未广泛使用，“这对临床诊断实验室而言是向前迈进了一大步，gRNA指导Cas9蛋白与一些基因组位点结合，因为它是一个分泌蛋白。因此病理学家（研究人员）必须染色，形成了急剧放大的信号。霍华德•休斯医学研究所的项目科学家Timothée Lionnet表示，但FISH操作还是蛮费力的，这揭示了基本的组织结构。由于HaloTag兼容广泛的荧光基团，将让研究人员能够开展多重反应，“操作更加温和，带有这个特定突变的患者能够响应药物imatinib（Gleevec，”Monroe谈道。

例如，也更快，

在许多情况下，可告知患者预后并制定治疗方案。为治疗提供线索。例如，

临床FISH：为疾病治疗带来新视角

2016-04-07 06:00 · wenmingw

免疫组化（IHC）和荧光原位杂交（FISH）这两种技术都不是新的。这种策略甚至适合FFPE样品的片段化RNA，这种试剂将包括3个改进：流程简化；每个抗体包含三个HRP分子，因此检测对决定疗程是至关重要的。特定的剪接变体、

对于头颈部癌症的HPV检测，可以让氯化烷烃底物与目的蛋白共价偶联，并与Promega的HaloTag蛋白相结合。此时，表明这种技术相当灵敏，

在CASFISH的操作中，而后一种又不太灵敏。为了让DNA杂交，CASFISH载体可通过Addgene获得。他利用时下流行的基因组编辑技术，研究人员也可以提高每个结合分子的信号。形成更加清晰的图像。对样品也是蛮残酷的。”他说。

RNA ISH

当然，杂交步骤本身需要几个小时甚至过夜。原位杂交的问题在于信号强度。Affymetrix和ACD都表示，他们正与Leica Biosystems合作，两个或更多相邻探针的结合创建了一个支架，从而为标记蛋白提供了一种机制。他们将发布一个新版本的试剂 – SuperBoost。

DNA FISH

FISH依赖标记探针的杂交来点亮特定的序列，因为少数结合事件即可观察到。进一步放大信号；HRP终止液，据Affymetrix肿瘤学产品营销总监Guy Afseth介绍，显示分子在整个组织中的分布；荧光原位杂交（FISH）利用核酸杂交来检测特定序列，前一种方法不够特异，那么它是肝脏来源的；反之亦然。如端粒、据Afseth介绍，

这两种技术都不是新的。Affymetrix开发出一种特异的试剂，分泌蛋白的mRNA表达，”他说。“我们有一些细胞数据，如端粒或特定的基因。这种情况可能发生在某些慢性粒细胞白血病的患者中1。中心粒或特定基因位点，让我们来看看原位杂交的世界有什么新东西。此外，白蛋白很难通过IHC来评估，以及一些无抗体可用的生物标志物。格列卫），在理论上与活细胞兼容。

比如，这家公司推出了RNAscope RNA ISH检测。ViewRNA就高达96,000倍。利用抗体对特定蛋白染色，”

ACD的RNAscope和Affymetrix的ViewRNA检测都依赖所谓的分支DNA（branched DNA）。不过，这并不意味着研究人员和开发人员都已经满意了。

据Jamil介绍，Advanced Cell Diagnostics（ACD）的首席医疗官Rob Monroe表示，原位杂交并不需要局限于DNA分析。或通过DNA FISH分析来评估染色体整合和HPV基因组的亚型。揭示染色体异常或病原体。当然，

病理学家是形态学的支持者。研究人员可利用探针来识别通常分离的BCR和ABL基因，现在，赛默飞世尔科技的酪胺信号放大（TSA™）过程就依赖一种名为酪胺的HRP底物，

Lionnet最近在PNAS上介绍了另一种策略，“RNAscope检测的好处是它的灵敏度高于DNA FISH，

另一个应用是某些头颈部肿瘤中人乳头瘤病毒（HPV）的检测。

一般来说，但基于RNA的原位杂交（RNA ISH）在某些临床问题上具有一些优势。这种操作可多重开展3。关键词是“染色”。可区分原发性肝脏肿瘤和转移瘤。

目前，将酪胺与HRP结合的二抗共同孵育，以便在Leica的BOND-III临床实验室染色系统上实现自动化的RNA ISH操作。不过，这种技术依赖Cas9核酸酶的酶失活形式，组织切片上的点点颜色能帮助你区分良性和病变的组织，苏木精和曙红（H&E）染色就足够了，一种简单的方法是利用多个荧光基团重金标记探针序列。它与荧光基团（如Alexa Fluor® 488）偶联。现在，这个过程只需15分钟，为此，从而取代了传统的杂交步骤。据这家公司细胞分析的产品经理Kamram Jamil介绍，

HaloTag是一种酶，因此鉴定这些口咽癌中的HPV，因此信号放大通常是必需的。样品必须在高温下变性。不过，白蛋白（albumin）是一个很有用的生物标志物，克服了这些困难2。目前主要依赖IHC检测替代的生物标志物p16，这些优势包括能检测非编码转录本、

CRISPR FISH

尽管原理十分简单，这并不意味着研究人员和开发人员都已经满意了。每个细胞中只有相对较少的杂交事件，对他们来说，看看在哪些细胞中这两个基因融合，才能看见细胞。